免疫治疗

免疫检查点（Immune checkpoint）是免疫系统的调理器。这些通路对自我耐受很重要，自我耐受可以避免免疫系统不加选择地攻击细胞。肿瘤细胞或肿瘤组织往往会利用一些手段激活免疫检查点，使抗原不可被T细胞识别，从而抑制了T细胞的免疫学作用，逃避了机体的免疫监视。

针对肿瘤免疫逃逸开发的抗肿瘤免疫疗法中，免疫检查点阻断剂已被证实对多种癌症治疗相当有效，例如CTLA-4、 PD-1相关药物等。但由于原发性或获得性耐药的原因，这类药物对部分患者治疗无效。的研究标明，一些表观遗传调理因子加入了抑制抗肿瘤免疫反应，说明表观遗传疗法或可增强抗肿瘤免疫反应，并克服对现有免疫疗法的对抗。

2021年10月20日，来自耶鲁大学癌症中心的严钦团队在Nature上宣布文章。该文章发明KDM5B通过作用于逆转录元件，增进肿瘤免疫逃逸。结果揭示，阻断KDM5B或阻断KDM5B-SETDB1相互作用，可以有效提高抗肿瘤免疫反应，克服免疫检查点抑制剂治疗对抗。

KDM5家族卵白是一类去组卵白甲基化酶，是KDM5 4种亚型中的一种，它加入基因的表观遗传调控历程。KDM5酶关于耐药性的泛起起到了重要作用，敲除编码KDM5酶（包括KDM5A与KDM5B）的基因或者是使用KDM5酶抑制剂，可以激活滋扰素信号通路，增强免疫应答。

研究团队通过Gene Ontology (GO)剖析技术发明KDM5B的表达与免疫系统历程中的基因呈负相关，然后使用免疫原性YUMMER1.7小鼠玄色素瘤模型对Kdm5b缺失造成的影响进行了一系列评估，并借助测序的要领发明KDM5B激活了I型滋扰素反应的途径，以及对逆转录元件的作用情况。作者利用人玄色素瘤细样本进行了验证。

通过文章发明，作者文章有两个要害性支撑点：

1. 在患者样本中发明了KDM5B的作用；

2. KDM5B作用点在逆转录原件实现表观遗传调控。

在这两个数据支撑点上，均接纳了TissueGnostics公司的全景组织定量剖析技术，不但在原位数据中精准获得了单细胞水平的卵白表达强度定量数据，还通过抗双链RNA抗体对RNA表达水平进行了定量剖析。宣布了看法：KDM5B通过作用于逆转录元件，增进肿瘤免疫逃逸。

实验部分

为了制止测序及生物信息学剖析数据带来的不确定性，作者团队使用了免疫组化和免疫荧光技术，在组织学原位进行了验证，在要害的环节中，还利用奥地利TissueGnostics公司全景组织流式定量剖析技术，进行图像收罗和定量剖析。为了体现数据的客观与精准性，作者用了大篇幅对这个技术要领进行了详细描述：

利用5X物镜进行全景预览，然后20X物镜对识别的组织区域进行全景扫描成像。再将获取的组织全景图像导入剖析软件中，原位单细胞识别及定量剖析技术识别阳性细胞及平均强度。其结果通过散点图与直方图泛起。利用正反向回溯功效实时调理cut-off线。

正反向回溯功效：组织、细胞数据剖析中运用正反向回溯功效，支持从图像到数据的正向剖析，也支持从数据结果到图像的反向回溯验证，将影像与剖析结果紧密结合，实现数字化图像、散点图及数据间的三方面实时联动。对数据有效性进行独立重复的验证，精准权衡组织细胞信号拆区分识结果，包管样本识别的精度、阳性率划分的阈值或是追溯阳性信号在组织中的原位信息的可靠性，更进一步资助研究者定位剖析干细胞等稀有细胞亚群。

01

作者接纳免疫荧光染色的组织样本，结合抗PD-1治疗之前的玄色素瘤样本进行转录组剖析，发明对免疫检查点（immune checkpoint blockade，ICB）有反应的患者KDM5B染色较弱，缺乏可检测到的KDM5B高玄色素瘤细胞，而对ICB有反应的患者有KDM5B高玄色素瘤细胞的主要亚群。这些结果标明KDM5B与肿瘤炎症水平呈负相关，可能是肿瘤免疫抑制剂响应低的生物标记物，靶向KDM5B可能诱导T细胞浸润并克服对ICB的耐药性。

Figure 1治疗前玄色素瘤免疫荧光样本melanoma cocktail（绿色）、KDM5B（红色）和DAPI（蓝色）

A-C：抗PD-1治疗的3名PD-1无应答患者的免疫荧光图像；D-F：3名完全应答患者的免疫荧光图像。G：肿瘤微情况中KDM5B和玄色素瘤标记物的平均强度散点图。KDM5B和玄色素瘤标记阳性的细胞位于右上象限。

02

作者研究了KDM5B抑制逆转录元件表达情况，针对RNA水平的验证，使用了抗双链RNA单抗-J2抗体，在KDM5B表达水平低的应答者中检测到比那些KDM5B水平高的无应答者更高水平的双链RNA。

Figure 2KDM5B缺失诱导内源性逆转录酶元件表达并形成dsRNA

用J2抗体（红色）和DAPI（蓝色）对免疫检查点抑制剂完全应答或无应答患者的代表性患者的dsRNA进行免疫荧光染色（左侧）和定量（右侧）。