yh533388银河

新闻中心

    哪些样品能用超微量测?一文助你判断样品是否兼容

    Nanophotometer?可以丈量的样品种类,是用户体贴的问题。特别是经常丈量的核酸类样品,我们一般用dsDNA的浓度作为示例,以展示设备的浓度丈量规模,而您可能会问,RNA可以丈量吗?引物可以丈量吗?短序列能测吗?DNA纳米质料能测吗?

    image.png

    超微量分担光度计并不直接丈量浓度,而是通过光学检测器丈量样品的吸光值,凭据朗伯-比尔定律盘算浓度的。因此,切合该定律的所有样品均可以被丈量。以NP80机型为例,检测器的检测规模为0.02A-330A(已换算为10mm下吸光值),波长规模为200-900nm,那么原则上样品的吸光值和吸收波长只要落在这个规模内,都可以被丈量,可获得定量或相对定量的浓度值和其他信息。

    image.png

    核酸中的嘌呤和嘧啶碱基有共轭双键,具有吸收紫外光的性质,其至大吸收波长在250nm-270nm之间。碱基与戊糖、磷酸形成核苷酸后,其至大吸收峰不会改变,至大吸收波长约在260nm,吸收低峰在230nm。目前通行的标准,在波长260nm处,1单位OD值的光密度相当于双链DNA(dsDNA)浓度为50ng/μl、单链DNA(ssDNA)浓度为37ng/μl、RNA浓度为40ng/μl、单链寡核苷酸为33ng/μl(通例值)。

    image.png


    也就是说,设备丈量的吸光值,乘以这些系数(1/ε),就可以获得对应样品的浓度值。任何种类的核酸样品都是可以丈量的,要害是在软件中正确选择样品种类。Nanophotometer?丈量界面可选择多种核酸样品类型,在报告中也会有对应的要领学及消光系数显示。也可以输入核苷酸的序列来确定样品具体的消光系数(可支持70万个以上碱基序列,但通常用于寡核苷酸具体消光系数简直认)。


    如果过失地选择了样品类型,但已完成了丈量,也有两种要领可以调解:

    要领一:不抬起样品盖,重新选择正确的样品类型,再次丈量。Implen的样品压缩法支持这种操作,而液柱拉伸法不建议一滴样品的多次丈量。

    要领二:在结果中检察吸光值数据,手动乘以消光系数,盘算浓度。

    例如:丈量RNA样品时,选择了dsDNA样品,测得浓度为200ng/μl,则样品实际浓度应为160ng/μl(200/50×40ng/μl)(暂不考虑很小的配景校正)。


    image.png

    关于卵白质应用,原理相同,凭据0.02-330A的吸光值检测规模,结合卵白质的消光系数ε,可确定任意卵白质样品的浓度检测规模。如BSA(消光系数0.667)检测规模为0.03-478mg/ml,则某消光系数为1.33的单抗样品检测规模即为0.015-239mg/ml。实际的线性规模需要凭据样品情况具体测试。 

    image.png

    Nanophotmeter?基于紫外-可见吸收光谱的丈量,不但可以胜任种种核酸和卵白质的定量,还具备全光谱丈量的优异性能,Implen在剖析化学领域也具有广泛的应用。样品压缩法的一大特点就是良好的样品兼容性,推出的4096阵列CMOS检测器也使丈量的可靠性进一步提高。关于多样化的样本丈量,Implen可以充分满足用户的期望。


    转载:江西yh533388银河民众号 链接:https://mp.weixin.qq.com/s/rFeCiftwwKivc3_HSeq9ig

    微信民众号

    come-here
    网站地图