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    技术干货:一文读懂菌液OD600丈量

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        微生物和细胞生长的光密度(OD)丈量是微生物学及生物发酵实验室中最常用的要领之一 ,用于在进行卵白表达或监测培养历程时确定收获的最佳时间。细胞、细菌或酵母在液体培养基中的生长情况(细胞密度、细菌生长、酵母生长)通常通过丈量600nm下的光密度(OD600)来获得。OD600丈量通常用于确定细菌培养物的生长阶段 ,这些丈量有助于确保在适当的细胞密度下收获细胞。

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        由于OD600丈量的光密度是由光散射而非光吸收引起的 ,因此细胞的巨细和形状以及死细胞和碎片可能会增加光散射。因此 ,当在相同的仪器上丈量时 ,处于相同密度水平(如Cells/mL)的差别细胞类型可能显示出差别的OD600值。

        细菌细胞的生长通常经历一系列连续的阶段 ,包括滞后、对数、静止和衰退。通常 ,应在对数期结束时收获细胞 ,使用样品的光密度OD600来确定何时抵达这一时间点 ,是很是便捷的。在诱导或收获之前 ,细胞通经通例生长至OD600抵达约0.4。

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    朗伯-比尔定律与OD600


        朗伯-比尔定律 ,凭据经验将光的吸收与样品的浓度联系起来。该定律标明 ,光通过特定样品的透射率(T=I/Io ,其中I=出射光 ,Io=入射光)、特定化合物的消光系数(ε)、样品中具有光吸收的物质的浓度(c)和光流传的距离(d)之间保存对数关系。凭据朗伯-比尔特定律 ,OD值与细菌浓度(C)或数量(N)具有类似的界说。然而 ,OD600的丈量实际上是浊度的丈量 ,因此 ,我们可以应用朗伯-比尔定律定律 ,但需要进行一些特另外考量 ,如样品浊度(浓度)的适用规模 ,设备收集非散射光的结构等。


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    OD600读数的差别


        关于混浊的样品 ,如细胞培养物 ,丈量的吸光度的主要来源于光散射 ,而不是完全遵循朗伯-比尔定律中的分子吸收的原理。因此 ,丈量取决于分光光度计的光学设置(比色皿和仪器出射狭缝狭缝之间的距离、单色器的性能、狭缝几何形状等) ,差别的仪器类型很可能会为相同的混浊样品提供差别的OD 600读数。因此 ,如果要比较差别分光光度计的结果 ,则必须首先使用两种差别仪器上的相同样本进行OD600值比较 ,并进行相关性的归一化。


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    OD600校正值公式


        NanoPhotometer?或OD600 DiluPhotometer?等仪器默认“校正系数”为1 ,如使用相应要领进行调解 ,将有助于在差别设备之间提供可比较的结果。


    OD600校正因子= 设备1丈量值 / 设备2丈量值


        或者使用创立适当的校准曲线来接纳更精确的要领 ,可以通过在差别浓度规模内比较丈量的OD600与预期的OD600来构建校准曲线。预期的OD600是通过使用替代技术(例如显微镜载玻片法)进行细胞计数 ,并使用经验规则将1个OD600=5×108个cells/ml的大肠杆菌联系起来。


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        通常建议使用试管或比色皿进行OD600丈量 ,以确保读数的稳定性 ,较概略积样品提供了更大的浊度平均值 ,误差相对较小。别的 ,为了避免菌体沉降过快 ,并给出随时间变革的OD读数 ,可向样品中添加甘油。关于一些很小的样品量要求 ,使用微滴进行丈量 ,也是可行的 ,特别是NanoPhotometer?的样品压缩法 ,在液膜中丈量 ,可制止液柱中显著的沉降现象。但需注意在上样前样品的充分混匀。

     

        用于丈量的仪器的线性规模关于笼罩培养物的整个生长周期至关重要 ,建议至少2.5 OD的OD限值以提供足够的事情规模。如果保存大宗的死细胞 ,使结果模糊不清 ,则样本可能在整个规模内不是线性的。如果样品仍然凌驾规模 ,则可能需要稀释;应仔细选择参数以笼罩整个所需区域 ,而不影响丈量的线性度。


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        为了减少OD600丈量所需的体积 ,并制止耗时且容易蜕化的手动稀释 ,可以使用特殊的比色皿。Implen的DiluCell?自动稀释比色皿可降低样品体积要求 ,并提供自动虚拟样品稀释。由于DiluCell?的奇特设计 ,光路从标准的10毫米减少到1毫米(DC 10)。凭据朗伯-比尔定律 ,光程因子为10。使用DiluCell?自动稀释可节省时间 ,并排除稀释误差和交叉污染。


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        德国Implen提供多种OD600丈量解决计划 ,包括应用于基础丈量和高级工艺开发的差别机型 ,具有可靠的丈量结果和富厚的软件功效 ,以及合规性功效 ,能够充分满足差别用户的需求。OD600丈量 ,认准德国Implen。


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